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足球直播凯氏定氮操作步骤

发布时间:2020-12-10 03:49

  凯氏定氮操作步骤_天文/地理_自然科学_专业资料。凯氏定氮操作步骤 1.消化:精密称取大豆样品 1.0g 左右,放入干燥的 250 ml 消化管中,加入 0.4g CuSO4、7g K2SO4、10ml H2SO4。先 200℃炭化,待泡沫停止后提高

  凯氏定氮操作步骤 1.消化:精密称取大豆样品 1.0g 左右,放入干燥的 250 ml 消化管中,加入 0.4g CuSO4、7g K2SO4、10ml H2SO4。先 200℃炭化,待泡沫停止后提高温 度到 450℃, 加热至液体沸腾, 待瓶内液体呈蓝绿色透明后, 再继续加热 0.5h。 冷却后加入 20ml 水,移入 100ml 容量瓶中,用少量水洗涤消化管 2~3 次, 洗液合并于容量瓶中定容 2.蒸馏:连接凯氏定氮装置,于水蒸气发生瓶内装水至 2/3 处,加甲基红指 示剂数滴及数 ml 硫酸,保持水呈酸性。加入数粒玻璃珠以防暴沸,调节火力 加热煮沸水蒸气发生瓶内的水。 3.吸收:向吸收瓶内加入 20g/L 硼酸溶液 20ml 及混合指示剂 2 滴,并使冷 凝管下端插入液面以下, 吸取 10ml 样品消化稀释液由进样口进入反应室, 并 以 10ml 水洗涤进样口使其流入反应室内,将 400g/L NaOH 溶液 10ml 倒入进 样口,立即夹紧螺旋夹,并加入少量蒸馏水,密封进样口。当蒸汽通入反应 室时,准确计时,反应产生的氨气通过冷凝管进入吸收瓶,蒸馏 5min,移动 吸收瓶,使冷凝管下端离开液面,再蒸馏 1min,然后用少量水冲洗冷凝管下 端外部,取下吸收瓶。 洗涤:停止加热,使反应室内的液体进入汽水分离器,打开进样口的螺旋夹, 将汽水分离器的液体放出。再向反应室内加入蒸馏水,夹紧螺旋夹,再次进 行加热至水蒸汽放出,停止加热,使反应室内的水进入汽水分离器,进行洗 涤。 4.滴定:用 0.025mol/L 硫酸标准溶液滴定吸收液至灰色。 5.计算: X=2cV×14×5.71/m X 为样品中蛋白质的含量,%;c 为硫酸标准溶液的浓度,mol/L;V 为样品 消化液消耗硫酸标准溶液的体积,ml;m 为样品的质量,g。 凯氏定氮法 凯氏定氮法是测定蛋白质的国标方法。2%硼酸溶液是测定方法中碱化蒸馏 时所使用的吸收液,用来吸收游离出的氨,然后用盐酸或硫酸标准溶液滴定,根 据混合指示剂颜色变化判断终点。 1 试剂与方法 1.1 2%硼酸吸收液的配制方法 (1)将 2 份 0.1%甲基红乙醇溶液与 1 份 0.1%次甲基蓝乙醇溶液混合。(2)将适量上述混合指示剂一次性加入已配制好的 2%硼酸溶液中,使溶液呈蓝紫色。 1.2 2%硼酸吸收液使用方法 按照国标方法(GB5009.5―85)操作,在平 行试验时,可将已滴定至终点的 2%硼酸吸收液重复使用。 1.3 配制方法 配制 2%硼酸吸收液时,混合指示剂加入量不宜过多,以透 过试剂瓶观察蓝紫色刚好透明为宜。若溶液偏蓝,用 0.1%甲基红乙醇溶液调至 蓝紫色;反之若偏紫红,可用 0.1%次甲基蓝乙醇溶液调至蓝紫色。 1.4 配制后的 2%硼酸吸收液可行预试验 即取少量吸收液于试管中,加入 1 滴氨水(1+2)观察其颜色变化是否明显与正常。 1.5 反应原理 样品中的蛋白质经硫酸和催化剂消化后, 分解的氨与硫酸结 合生成硫酸铵,然后碱化蒸馏使氨游离,用 2%硼酸溶液吸收生成硼酸铵。其反 应为:2NH3+4H3BO3→(NH4)2B4O7+5H2O 使吸收液由酸性变为碱性,混 合指示剂由蓝紫色变为绿色, 然后用盐酸或硫酸标准溶液滴定,使混合指示剂再 由绿色返至蓝紫色即为终点。重复使用时,仍可按上述原理反应。 1.6 终点颜色 滴定终点观察颜色时, 样品消化液终点与空白消化液终点应 色调一致。 2 结果 一次使用 2%硼酸吸收液的国标方法与重复使用 2%硼酸吸收液的新方法进 行对照实验,经 t 检验,t=0.676, P>0.05,两种使用方法差异无显著性。对照 实验结果见表 1。 表 1 对照实验结果(略) 3 讨论 用一次性加入混合指示剂的方法配制 2%硼酸吸收液,将已滴定至终点的吸 收液重复使用,用于平行实验。这样可简化实验操作,尤其在进行批量样品检验 时,对于 2%硼酸吸收液可不必逐个滴加混合指示剂,减少 50%吸收次数,节约 50%用量,从而提高工作效率和经济效益。